粒線體功能分析
MitoPlates
以更高的分辨率分析粒線體
粒線體功能的新探針
MitoPlates提供了一種強大的新研究工具,允許科學家在一個實驗中運行預先配置的96組粒線體功能檢測。粒線體可以以新的方式進行詢問和表徵,觀察底物代謝率、對藥物和其他化學物質的敏感性以及粒線體相關基因突變的影響。
測定原理
通過測量來自產生NAD(P)H或FADH2的代謝底物(如 L-蘋果酸、琥珀酸、丙酮酸等)的電子流入和通過電子傳遞鏈的速率來測定線粒體功能。每種底物遵循不同的途徑,使用不同的轉運蛋白進入線粒體,不同的脫氫酶產生NAD(P)H或FADH2,電子從起始端(複合物1或2)移動到電子傳輸鏈的遠端部分,其中四唑鎓氧化還原染料(MC)充當還原後變成紫色的末端電子受體。額外的MitoPlate檢測可探測線粒體對一組22種不同抑製劑的敏感性。
簡單的測定程序:
第1步:製備含有細胞透化緩衝液和氧化還原染料的測定混合物並將其移入適當的孔中。
第2步:通過向所有孔中添加2x細胞懸液開始檢測。
第3步:將微孔板裝入OmniLog®以動態讀取紫色形成的速率。
獨特的功能和優勢:
1. MitoPlates預裝了96種測試可供使用
2. 用於測量底物和抑製劑對粒線體功能影響的平板
3. 適用於任何細胞類型的簡單、穩健的實驗方案——貼壁或懸浮細胞、轉化細胞系或原代細胞
4. 檢測每孔僅需要20,000至40,000個細胞
5. 新型四唑染料化學在易於閱讀的比色分析中提供了末端電子受體
6. OmniLog儀器提供多個板的自動溫控孵育和動力學讀數(50塊板,每15分鐘,或16塊板,每5分鐘)